ما المشكلة إذا لم تظهر الفرق في Western Blot؟

ما المشكلة إذا لم تظهر الفرق في Western Blot؟
Anonim

إجابة:

كثير…

تفسير:

هناك العديد من الأسباب وراء عدم ظهور العصابات على اللطخة الغربية. هل عملت مجموعات العينات والأجسام المضادة في الماضي؟

فيما يلي بعض ما يمكنني التفكير به في الوقت الحالي والذي قد يؤدي إلى عدم ظهور النطاقات:

  1. هل نقل البروتين من الجل؟ حاول تلطيخ الغشاء بشيء مثل ponceau S أو amido black لمعرفة ما إذا كانت العصابات موجودة. في بعض الأحيان ، يمكنك رؤية أشرطة البروتين على الغشاء عن طريق ترطيبه والاحتفاظ به بزاوية للضوء.

  2. هل يعمل الجسم المضاد الأساسي؟ إنها طريقة صعبة الاختبار والطريقة الوحيدة التي يمكنك من خلالها هي تضمين عنصر تحكم إيجابي حيث تعرف أن لديك البروتين محل الاهتمام. إذا كان لديك بعض البروتين الذي يهمك ، فيمكنك محاولة اكتشافه على الغشاء النشاف الغربي (أي أنك لا تدير الجل) وترى ما إذا كنت تحصل على نتيجة إذا عالجت الغشاء كما لو كانت لطخة غربية.

  3. هل يتعرف الجسم المضاد الثانوي على الجسم المضاد الأساسي؟ مرة أخرى ، واحدة صعبة للاختبار. حول الاختبار الوحيد الذي يمكنك القيام به هو الاختبار الفوري المذكور أعلاه في 2.

  4. هل يعمل "نظام الكشف"؟ بناء على طريقة الكشف التي تستخدمها ، يمكنك تجربة ارتفاع في بعض الأجسام المضادة الثانوية لمعرفة ما إذا كان حل الكشف وأيض ا عامل التحفيز / الإنزيم الموجود في الجسم المضاد الثانوي يعمل أم لا. وهذا هو ، هل يمكن أن تؤدي إلى رد الفعل فقط مع الأجسام المضادة الثانوية؟

أخير ا ، قد يكون الأمر بسيط ا مثل أحد الحلول المستخدمة أثناء فحص المؤامرة التي يتم تكوينها بشكل غير صحيح. على سبيل المثال ، إذا كان تركيز الملح خاطئ ا في المخزن المؤقت ، فقد يتسبب ذلك في إطلاق الأجسام المضادة من اللطخة. سيحدث نفس الشيء أيض ا إذا كان الرقم الهيدروجيني للمخازن المؤقتة غير صحيح.

السبب "الغريب" لعدم ظهور لطخة غربية كنت قد مررت بها شخصيا كان عندما قمنا بتغيير مورد مسحوق الحليب الذي استخدمناه لسد الغشاء. احتوى المسحوق من المورد الجديد على فسفاز الفوسفوتازين الذي أزال جميع مجموعات الفوسفات التي كنا نحاول اكتشافها باستخدام جسمنا المضاد للفوسفوتيروسين.