لماذا يتم استخدام الدناز والليزوزيم في خطوات التحلل أثناء تنقية البروتين؟

إجابة:

لتنقية جزء البروتين …

تفسير:

إذا كنت تقوم بتنقية بروتين (غالب ا ما يكون محدد ا) ، فستحتاج إلى التخلص من أكبر قدر ممكن من القمامة التي قد تكون مرتبطة بها.

هذا يعتمد إلى حد ما على البروتين الذي تتبعه ، لكنه عموم ا فكرة جيدة ، وخاصة في إعدادي تنقية ، للتخلص من أكبر عدد ممكن من الشوائب.

1:

نظر ا لأن البروتينات كبيرة عموم ا ، وبالتالي ستظهر في النطاقات السفلية من الكسر (شديد الطرد المركزي) ، فأنت تريد التخلص من أي من الأحماض النووية ، خاصة إذا كان البروتين الذي تدفنه يتعلق بأمثال Pol1, عكس النسخ أو أي إنزيم آخر مشارك في النسخ المتماثل / النسخ / الترجمة..

يمكنك فصل الأحماض النووية الموجودة في العينة باستخدام DNAse: سيؤدي ذلك إلى تحلل الحمض النووي تمام ا إلى الأجزاء المكونة له.

عقلك ، هناك العديد من الدناز ، تختلف جميعها في آليتها وخصائصها في الركيزة. اعتمادا على DNAse المستخدمة ، فإنه يمكن أن تظهر أيضا لانهائي أو Exo- نشاط نوكلياز …

أكثر إلى هذه النقطة ، ريبونوكلياز هو أكثر ملاءمة ، لأن الحمض النووي الريبي عادة ما يكون أكثر ضمن نطاق الطفو / الكسر من البروتينات ، ويمكن ربطه بالبروتين.

2:

الليزوزيم: إنزيم له وظيفتان على الأقل:

إنه يحلل الإنزيمات: إن معظم البروتينات المحمولة في مجرى الدم هي جليكوسيلات: تحتوي على جزيئات سكر قليلة مرتبطة بها. سيقوم الليزوزيم بإزالة بقايا السكر.

كما أن لديها القدرة على تحطيم جدار الخلية من البكتيريا إيجابية الجرام ، مما تسبب لهم ليز. (إذا كنت ترغب في تنقية البروتين من البكتيريا إيجابية الجرام)

ستظهر أي منتجات متدهورة ، إما الحمض النووي أو حطام السكر ، في الأجزاء العليا من أنبوب الطرد المركزي بسبب طفوها "الأفتح" ….