لماذا يتم استخدام GAPDH في اللطخة الغربية؟ + مثال

لماذا يتم استخدام GAPDH في اللطخة الغربية؟ + مثال
Anonim

إجابة:

غالب ا ما يستخدم GAPDH كعنصر تحكم تحميل.

تفسير:

في النشاف الغربي ، نستخدم GAPDH غالب ا كعنصر تحكم في التحميل. ما يعنيه هذا هو أنه بالبحث عن GAPDH ، يمكننا التحقق من أن لدينا كميات مكافئة محملة من البروتينات في ممرات مختلفة من اللطخة.

مثال على الاستخدام - قل أن لدينا مرض ا نعتقد أنه يسبب ارتفاع ا لبروتين معين في الخلية. سنكون عينة من الخلايا "صحية" وعينة أخرى من الخلايا "المريضة". ثم نقوم بتحميل كميات من البروتين المكافئ من كلتا العينات على هلام للبقعة الغربية.

بعد البحث عن وصمة عار في البروتين الذي يهمنا ، نجد أنه في الخلايا المريضة يرتفع مستوى البروتين بالفعل (وهذا الشريط أغمق يتم إنتاجه على اللطخة). لإثبات أن هذه الزيادة في البروتين ناتجة عن تغيير في التعبير في الخلية ، بدلا من عمل فني في التحميل (أي أن الفرقة الأكثر غرابة ناتجة عن تغيير في تعبير البروتين في الخلايا ، وليس عن طريق تحميلنا بطريق الخطأ أكثر من عينة "المرض" من العينة "السليمة") سنبحث أيض ا عن اللطخة لـ GAPDH لإظهار أن مستويات البروتين الكلية هي نفسها في كلا الممرين.

من خلال القيام بذلك ، نظهر أن البروتين المكافئ قد تم تحميله في الممرين وأن التغير في شدة الشريط الذي نلاحظه يرجع إلى التغيرات في تعبير البروتين للبروتين محل الاهتمام.