لماذا لطخة غربية تستخدم لتأكيد إليسا؟ + مثال

إجابة:

عادة هذا هو اختبار خصوصية الأجسام المضادة.

تفسير:

في ELISA ، من الصعب للغاية معرفة ما إذا كان الجسم المضاد ملتصق ا ببروتين الاهتمام ، أو بروتين مختلف تمام ا ، أو مجموعة من البروتينات.

سيتم استخدام اللطخة الغربية للتحقق من خصوصية الجسم المضاد (يجب ملاحظة أن اللطخة الغربية قد لا تكتشف جميع التفاعلات مع البروتينات غير الصحيحة).

في اللطخة الغربية ، يمكنك رؤية حجم البروتين الذي يرتبط به الجسم المضاد (لا يمكنك في ELISA). لذلك ، على سبيل المثال ، إذا كان يجب أن يكون جسمك المضاد مرتبط ا ببروتين من 56 كيلو دالتون وترى عصابة عند 56 كيلو دالتون على اللطخة ، فيمكنك أن تكون واثق ا بشكل معقول من أن الجسم المضاد يرتبط بالبروتين الصحيح.

من ناحية أخرى ، إذا شاهدت فرقة عند 32 كيلو دالتون ، فستستنتج أن الجسم المضاد يرتبط بالبروتين الخطأ. وبالمثل ، إذا ظهرت العديد من الفرق على اللطخة الغربية ، فإن ذلك يشير (في غياب تدهور البروتين) إلى أن الجسم المضاد كان ملزما بمجموعة من البروتينات المختلفة.

في مثال الفرقة 32 كيلو دالتون التي تظهر على الهلام ، وكذلك النطاقات المتعددة ، قد يوحي أن الجسم المضاد يفتقر إلى خصوصية ELISA وأن أي نتائج تظهر في ELISA قد لا تكون خاصة بالبروتين موضع الاهتمام.

إذا قمت بإجراء هذا النوع من الاختبارات ، فقد أدرج نوع ا من كاشف "التداخل" لاختبار الجسم المضاد. على سبيل المثال ، إذا قمت برفع الجسم المضاد إلى الببتيد ، فقد أدرج الببتيد في محلول الجسم المضاد الأساسي لاختبار الارتباط الصحيح. وهذا يعني أنه في ظل وجود الببتيد ، لا ينبغي أن أرى أي شريط أو أي نتيجة من ELISA لأن الجسم المضاد الرئيسي الخاص بي لن يكون قادر ا على الارتباط بسبب وجود فائض من الببتيد.